臥螺離心機在實驗室的應用測試實例介紹
差速沉降離心法的舉例:
這是最普通的離心法。即采用逐漸增加臥螺離心機離心速度或低速和高速交替進行離心,使沉降速度不同的顆粒,在不同的離心速度及不同離心時間下分批分離的方法。此法一般用于分離沉降系數(shù)相差較大的顆粒?!?br />
差速離心首先要選擇好顆粒沉降所需的離心力和離心時間。當以一定的離心力在一定的離心時間內進行離心時,在離心管底部就會得到最大和最重顆粒的沉淀,分出的上清液在加大轉速下再進行離心,又得到第二部分較大較重顆粒的沉淀及含較小和較輕顆粒的上清液,如此多次離心處理,即能把液體中的不同顆粒較好地分離開。此法所得的沉淀是不均一的,仍雜有其它成分,需經(jīng)過2~3次的再懸浮和再離心,才能得到較純的顆粒。
此法主要由于組織勻漿液中分離細胞器和病毒,其優(yōu)點是:操作簡易,離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開,并可使用容量較大的角式轉子。缺點是:須多次離心,沉淀中有夾帶,分離效果差,不能一次得到純顆粒,沉淀于管底的顆粒受擠壓,容易變性失活。
密度梯度區(qū)帶離心法(簡稱區(qū)帶離心法):
區(qū)帶離心法是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區(qū)帶的分離方法。此法的優(yōu)點是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適應范圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降系數(shù)差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會擠壓變形,能保持顆?;钚?,并防止已形成的區(qū)帶由于對流而引起混合。
此法的缺點是:①離心時間較長;②需要制備惰性梯度介質溶液;③操作嚴格,不易掌握。
密度梯度區(qū)帶離心法又可分為兩種:
差速區(qū)帶離心法:當不同的顆粒間存在沉降速度差時(不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降系數(shù)差)。臥螺式污泥脫水機組,在一定的離心力作用下,顆粒各自以一定的速度沉降,在密度梯度介質的不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法稱為差速區(qū)帶離心法。此法僅用于分離有一定沉降系數(shù)差的顆粒 (20%的沉降系數(shù)差或更少)或分子量相差3倍的蛋白質,與顆粒的密度無關,大小相同,密度不同的顆粒(如線粒體,溶酶體等)不能用此法分離。
離心管先裝好密度梯度介質溶液,樣品液加在梯度介質的液面上,離心時,由于離心力的作用,顆粒離開原樣品層,按不同沉降速度向管底沉降,離心一定時間后,沉降的顆粒逐漸分開,最后形成一系列界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶,沉降系數(shù)越大,往下沉降越快,所呈現(xiàn)的區(qū)帶也越低,離心必須在沉降最快的大顆粒到達管底前結束,樣品顆粒的密度要大于梯度介質的密度。梯度介質通常用蔗糖溶液,其最大密度和濃度可達1.28kg/cm3和60%。此離心法的關鍵是選擇合適的離心轉速和時間。
(2)等密度區(qū)帶離心法:離心管中預先放置好梯度介質,樣品加在梯度液面上,或樣品預先與梯度介質溶液混合后裝入離心管,污泥脫水機通過離心形成梯度,這就是預形成梯度和離心形成梯度的等密度區(qū)帶離心產(chǎn)生梯度的二種方式。
離心時,樣品的不同顆粒向上浮起,一直移動到與它們的密度相等的等密度點的特定梯度位置上,形成幾條不同的區(qū)帶,這就是等密度離心法。體系到達平衡狀態(tài)后,再延長離心時間和提高轉速已無意義,處于等密度點上的樣品顆粒的區(qū)帶形狀和位置均不再受離心時間所影響,提高轉速可以縮短達到平衡的時間,離心所需時間以最小顆粒到達等密度點(即平衡點)的時間為基準,有時長達數(shù)日。等密度離心法的分離效率取決于樣品顆粒的浮力密度差,密度差越大,分離效果越好,與顆粒大小和形狀無關,但大小和形狀決定著達到平衡的速度、時間和區(qū)帶寬度。等密度區(qū)帶離心法所用的梯度介質通常為氯化絕CSCl,其密度可達 1.7g/cm3。此法可分離核酸、亞細胞器等,也可以分離復合蛋白質,但簡單蛋白質不適用。
收集區(qū)帶的方法有許多種,例如:
(1)用注射器和滴管由離心管上部吸出。
(2)有針刺穿離心管底部滴出。
(3)用針刺穿離心管區(qū)帶部份的管壁,把樣品區(qū)帶抽出。
(4)用一根細管插入離心管底,泵入超過梯度介質最大密度的取代液,將樣品和梯度介質壓出,用自動部分收集器收集。
祁立環(huán)保設備的優(yōu)勢:
第一:祁立環(huán)保專注于追求專業(yè)化、規(guī)?;?、國際化的發(fā)展,以專業(yè)真誠服務于客戶.
第二:具備科研、開發(fā)、中試、系統(tǒng)集成等綜合技術能力,以及整機和零部件試驗、檢測等多種硬件設施和軟件條件.